医学免疫学第十九章免疫学检测技术讲义

一、先关的基本理论
　　1.抗原，抗体结合反应的特点有？
　　1）特异性：
　　A.亲和力：
　　B.亲合力：
　　抗原抗体结合力起主要作用的是疏水作用
　　2）可见性：
　　特异性和可见性是免疫诊断中抗原抗体反应的基本原理。
　　3）可逆性：
　　为非共价键互补结合，
　　2.抗血清：
　　3.抗原，抗体结合反应的影响因素有？
　　1）温度：
　　2）PH度：
　　3）电解质：
　　4）抗原抗体比例：

　　二、方法技术
　　3.抗原抗体反应的基本检测方法有？
　　1）凝集反应：包括：
　　A.直接凝集：
　　ABO血型抗原的测定（最常用的是玻片凝集）；诊断伤寒的肥达氏反应
　　B.间接凝集：
　　注意它包被的是可溶性抗原
　　Coomb’s试验
　　C.间接凝集抑制试验：
　　D.反向间接凝集试验：
　　2）沉淀反应：
　　A.单向免疫扩散是将一定量测定待检物（常常用于测定血清抗体IgG、M，补体C3（也是诊断补体成分先天缺陷最有用的试验）含量）的免疫学方法：
　　B.双向免疫扩散：
　　C.对流免疫电泳：（简称体渗原泳：抗体的电渗作用，抗原的电泳作用）对流免疫电泳用于抗原或抗体的定性检测。
　　注意抗体向负极移动的原因再强调一下：由于抗体的电渗作用大于电泳作用。
　　D.免疫比浊可用于IgG测定（注意最常用于免疫球蛋白测定的是单向免疫扩散）：
　　3）补体参与的反应：
　　利用抗体和红细胞上的抗原结合，激活补体，导致红细胞溶解，用溶血现象作为指示系统帮助判定结果。如补体结合实验和溶血空斑试验。
　　1）免疫标记技术：
　　使用广泛
　　A.免疫荧光法：
　　对抗原进行免疫组化定位
　　（四）化学发光物质标记分析
　　将发光物质标记抗原或抗体进行反应，发光物质在反应剂激发下生成激发态中间体，当
　　激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子，用自动发光分析仪能接收光信号，通过测定光子的产量，以反映待检样品中抗体或抗原的含量。
　　注意化学发光和免疫荧光的区别。
　　B.免疫印迹法（Western Blot）
　　C.酶免疫测定：
　　ELISA
　　是酶免疫测定技术中应用最为广泛的技术。包括双抗夹心法；间接法；酶联免疫斑点实验
　　1.用ELISA双抗体夹心法：用于检测抗原。
　　2间接法：用于检查特异抗体。用已知抗原包被固相，加入待检血清标本，再加酶标记的二抗，加底物观察显色反应。
　　3.酶联免疫斑点试验：其基本原理是用已知细胞因子的抗体包被固相载体，加入待检的效应细胞，温育一定时间后洗去细胞，如待检效应细胞产生相应细胞因子，则与已包被的
　　抗体结合，再加入酶标记抗该细胞因子抗体，加底物显色。
　　4.免疫组化技术
　　D.放射免疫测定：是免疫学测定方法中敏感性最高的试验。
　　放射性核素通常指的的是125I,131I.
　　小节：问能应用检测抗体的方法有哪些？
　　4.淋巴细胞如何进行测定？
　　1）淋巴细胞的分离和类型鉴定
　　利用物理特性（比重，表面粘附性质）：
　　利用表面标记：
　　A.外周单个核细胞的分离（PBMC）：葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法Ficoll，Percoll不连续密度梯度沉淀法
　　B.从外周血分离淋巴细胞亚群的方法有？
　　（1）尼龙棉分离法，玻璃平皿法（根据表面粘附性质），
　　（2）E花环分离（根据表面标记）：（3）免疫磁珠
　　（3）免疫荧光法：常用直接或间接免疫荧光法检查淋巴细胞的表面标志，鉴定细胞的群、亚群
　　（4）流式细胞仪（用于T淋巴细胞亚群测定）借助荧光激活细胞分选器对免疫细胞及其他细胞进行快速准确鉴定和分类的技术
　　2）淋巴细胞功能测定
　　A.评价T淋巴细胞功能（测定的是非特异性细胞免疫功能）的试验是：PHA淋巴细胞转化试验
　　B.测定T细胞数量的试验是：E花环试验
　　T细胞增殖试验：
　　C.细胞毒试验：可用于测定NK细胞杀伤活性；测定Tc细胞的效应功能
　　种类：
　　原理
　　D.B细胞功能测定：溶血空斑试验（为测定的是抗体生成细胞数，非B细胞数的试验，也是细胞水平上检测抗体形成能力的方法）
　　5.细胞因子检测的方法有？
　　1）生物学检测法：
　　2）免疫学检测法：
　　方法有如用细胞因子单克隆抗体包被固相的双抗体夹心法或ELISPOT测定法
　　3）分子生物学检测法：PCR等，为细胞因子检测最灵敏的方法
　　6.细胞因子检测的意义？
　　1）了解机体的免疫状况
　　2）了解自身免疫发生的机制
　　3）检测移植排斥反应
　　4）确定细胞亚群